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    发布时间:2022-09-25   点击次数:60次
      单抗制备会由于亚克隆细胞生长环境不合适,导致融合细胞染色体丢失,分泌特性改变,亲和力从高变低,这时就需要及时更换培养液,当细胞增长到一定密度的时候,培养基就开始变颜色,影响融合细胞的生长,造成染色体丢失;控制好细胞的密度,密度过大使新加入的培养基不至于很快被消耗,影响融合细胞的生长,造成染色体丢失;不要过于频繁操作细胞,当细胞生长密度不是很大的时候,不要频繁操作,否则细胞容易出现死亡或者生长形态发生明显变化。
     
      单抗制备为什么免疫后没有效价或免疫后效价低?
      (1)设计的抗原与被免疫的动物内源蛋白有同源性或者抗原是免疫原性极差的小分子物质。对于前一种情况应该重新设计抗原,设计抗原时尽量选取目标蛋白特异性的序列,可以设计为短肽然后再与载体蛋白偶联之后免疫;对于后一种情况,首先确认小分子物质是否已经正确地和载体蛋白偶联,如果偶联没有问题,可以更换其它的载体蛋白,一般来说KLH是所有载体中较为优先考虑的蛋白。
      (2)免疫的周期不正确。免疫周期过长或过短,各免疫步骤之间的间隔过长或过短都有可能影响免疫效果,详细请参考本站有关动物免疫的部份,实际操作中的相关程序与本站推荐的程序相差尽里不超过50%的偏差。
      (3)免疫佐剂不合适。在免疫时,对于某些抗原可能效果不佳,弗低佐剂也不能保证完全有效,此时可以考虑更换佐剂尝试。
      (4)免疫剂量不合理。过大的免疫剂量可能导致免疫耐受,过少的免疫剂量可能无法激活免疫应答。一般来说,实际免疫剂量与本站所推荐的剂量不要相差两倍以上。
      (5)免疫途径不合理。对于有些免疫原性弱的抗原,可以考虑脾内免疫方法,具体操作本站上也有详细的讲解。
      (6)测效价的过程存在错误操作,尤其考虑包被是否成功或二抗使用是否正确。同时,一抗(即血清)稀释梯度尽量放宽,一般建议从1:500或1:1000开始作梯度稀释。对于小分子物质,效价达到1:2000仍可视为免疫成功。
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